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親和層析
發(fā)布時(shí)間:2020-04-27

1. 親和層析的基本原理:

       在生物分子中有些分子的特定結(jié)構(gòu)部位能夠同其他分子相互識別并結(jié)合,如抗原和抗體的識別結(jié)合、酶與底物(包括酶的競爭性抑制劑和輔助因子)的識別結(jié)合、激素與受體的識別結(jié)合,核酸中的互補(bǔ)鏈、多糖與蛋白復(fù)合體等等,這種結(jié)合既是專一的,又是可逆的。生物分子間的這種結(jié)合能力就稱為親和力。

       將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和介質(zhì)制成固相吸附劑放置在層析柱中,當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過層析柱時(shí),與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質(zhì)分開,然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘?,改變結(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來,這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析。

       親和層析具有高選擇性、高活性回收率、高純度,且純化過程簡單、迅速,分離效率高等特點(diǎn),對分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效,成為生化工程中分離提純生物活性物質(zhì)的重要方法。但親和層析必須針對某一分離對象,制備專一的層析介質(zhì)和尋求層析的穩(wěn)定條件,因此親和層析的應(yīng)用范圍受到了一定的限制。

2. 載體的基本要求和選擇:

       理想的載體應(yīng)具有下列基本條件:(1)不溶于水,但高度親水;(2)惰性物質(zhì),非特異性吸附少;(3)具有相當(dāng)量的化學(xué)基團(tuán)可供活化;(4)理化性質(zhì)穩(wěn)定;(5)機(jī)械性能好,具有一定的顆粒形式以保持一定的流速;(6)通透性好,最好為多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),使大分子能自由通過;(7)能抵抗微生物和醇的作用。

3. 影響層析分離的主要因素:

       影響親和層析分離的主要因素有:(1)離子強(qiáng)度,主要影響靜電作用和疏水性相互作用;(2)pH值,通過改變配基和蛋白質(zhì)上帶電基團(tuán)的離子化程度對親和結(jié)合產(chǎn)生影響;(3)抑制氫鍵形成的物質(zhì),如脲和鹽酸胍,主要削弱親和結(jié)合作用力中的氫鍵;(4)溫度的改變會使分子和原子的運(yùn)動劇烈程度發(fā)生改變,從而對親和作用產(chǎn)生影響;(5)在親和體系中加入一些離子或螯合劑,也將影響親和作用力。



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